NASBA
NASBA (Nucleic Acid Sequence-Based Amplification) to izotermiczna metoda amplifikacji kwasów nukleinowych, wykorzystywana w diagnostyce molekularnej. W przeciwieństwie do PCR, NASBA przebiega w stałej temperaturze (najczęściej 41°C), co eliminuje potrzebę stosowania termocyklerów.
Technika NASBA pozwala na selektywną amplifikację RNA przy użyciu trzech enzymów: odwrotnej transkryptazy, RNazy H oraz polimerazy RNA T7. Proces ten umożliwia wykrywanie nawet niewielkich ilości materiału genetycznego patogenów w próbkach klinicznych. Główną zaletą metody jest wysoka czułość i specyficzność oraz szybkość uzyskiwania wyników (zwykle 90-120 minut).
W praktyce klinicznej NASBA znajduje zastosowanie w diagnostyce chorób infekcyjnych, wykrywaniu wirusów RNA (np. HIV, HCV), bakterii oraz w onkologii molekularnej. Metoda ta jest szczególnie przydatna w przypadkach, gdy konieczne jest wykrycie żywych mikroorganizmów, ponieważ umożliwia amplifikację mRNA, który szybko ulega degradacji po śmierci komórki.
Powiązane wpisy
- Leksykon chorób i schorzeń
Infekcja norowirusowa – Diagnostyka i diagnoza
Norowirusy, będące nieosłoniętymi, jednoniciowymi wirusami RNA z rodziny Caliciviridae, są główną przyczyną ostrego nieżytu żołądkowo-jelitowego (AGE), odpowiadając za około 17% przypadków ostrej biegunki na świecie. W USA powodują rocznie 19-21 milionów zachorowań, 900 zgonów oraz liczne hospitalizacje i wizyty na oddziałach ratunkowych. Okres inkubacji wynosi 24-48 godzin, a objawy utrzymują się 12-60 godzin, z dominującymi wymiotami, biegunką i skurczami żołądka. Diagnostyka opiera się głównie na obrazie klinicznym i kryteriach Kaplana, jednak w przypadkach ciężkich, u osób z obniżoną odpornością lub podczas epidemii zalecane jest potwierdzenie laboratoryjne. Preferowaną metodą jest RT-qPCR, charakteryzująca się czułością i swoistością na poziomie 90-100%, zdolna do wykrycia 10-100 kopii wirusa i różnicowania genogrup I i II. Testy immunoenzymatyczne (EIA) mają niższą czułość (31-50%) i są stosowane głównie w badaniach epidemiologicznych, natomiast mikroskopia elektronowa i inne metody (RT-LAMP, NASBA, ISC-RT-qPCR, biosensory) mają ograniczone zastosowanie ze względu na koszty i dostępność.
bezobjawowe wydalanie wirusa, biegunka, diagnostyka laboratoryjna, diagnostyka molekularna, diagnostyka różnicowa, genotypowanie, gorączka, jednoniciowy wirus RNA, kryteria Kaplana, mikroskopia elektronowa, NASBA, norowirusy, obniżona odporność, okres inkubacji, ostry nieżyt żołądkowo-jelitowy, RT-LAMP, RT-PCR, skurcze żołądka, szybki test immunochromatograficzny, test immunoenzymatyczny, wirusowe RNA, wodnisty stolec, wymioty, zapalenie żołądka i jelit - Leksykon chorób i schorzeń
Denga – Diagnostyka i diagnoza
Denga jest wirusową chorobą przenoszoną przez komary, której diagnostyka laboratoryjna jest kluczowa dla właściwego leczenia i nadzoru epidemiologicznego. W ostrej fazie (0-5 dni od wystąpienia objawów) zaleca się stosowanie testów wykrywających wirusa lub jego RNA, takich jak RT-PCR (czułość 80-90%, swoistość 95%) oraz testy na antygen NS1 (ELISA lub szybkie testy immunochromatograficzne), które potwierdzają aktywne zakażenie. Po 5-7 dniach od początku objawów diagnostyka opiera się głównie na serologii, wykrywającej przeciwciała IgM (pojawiające się około 4-5 dnia i utrzymujące do 12 tygodni) oraz IgG (pojawiające się po 10-14 dniach i utrzymujące się latami). Testy serologiczne, takie jak MAC-ELISA i PRNT, pozwalają na rozróżnienie zakażeń pierwotnych i wtórnych, choć mogą występować reakcje krzyżowe z innymi flawiwirusami, np. Zika. Diagnostyka różnicowa obejmuje m.in. chikungunya, malarię, dur brzuszny i COVID-19.
amplifikacja kwasu nukleinowego, antygen NS1, bakteriemia, ból zagałkowy, choroba wirusowa, echokardiografia, flawiwirus, glikoproteina, gorączka krwotoczna denga, hipowolemia, hodowla komórkowa, izolacja wirusa, krwawienie wewnątrzczaszkowe, kwas nukleinowy wirusa, leukopenia, nadzór epidemiologiczny, NASBA, objaw krwotoczny, obrzęk mózgu, próba wątrobowa, przeciwciało IgG, przeciwciało IgM, przepuszczalność naczyń, reakcja łańcuchowa polimerazy, Real-time RT-PCR, RT-PCR, serotyp wirusa, test hamowania hemaglutynacji, test immunochromatograficzny, test immunoenzymatyczny, test neutralizacji redukcji płytek, trombocytopenia, wirus dengi, wyciek osocza, wysypka plamista, wysypka plamisto-grudkowa, zaburzenie krzepnięcia